DIBS C18 / C4

DIBS = Direct Injection of Biological Samples

Neuartige Phasen in Vorsäulen oder Standard-Säulen für Proteinentfernung aus biologischen Proben, wie Blutplasma, Serum, Urin, Milch, Fermentationsansätze, cerebrospinal Flüssigkeiten und zelluläre Inkubationsmedien, mit anschliessender Probentrennung

Die innere Oberfläche des engporigen Partikels wird mit unpolarem C18 oder C4 modifiziert, dagegen wird die äussere Oberfläche der Körnen mit hydrophiler Diol-Phase belegt. Die Proteine und andere Makromoleküle können in die kleinen Poren nicht eindringen sie werden an der äusseren hydrophoben Oberfläche nicht retardiert und fliessen bei einem wässrigen Eluenten mit dem Lösungsmittelfront schnell, ungetrennt durch die Säule. Die kleinere Molekülen, wie Arzneiwirkstoffe, die von den engen Poren nicht ausgeschlossen werden, können dann mit Erhöhung der organischen Anteil im Eluent getrennt und analysiert werden.

Nach Zentrifugieren oder Filtration können die Proben direkt auf DIBS C18 oder C4 Vorsäulen injiziert werden. Aufwändige herkömmliche Probevorbereitung ist nicht mehr nötig. Auf eine 10 mm langen DIBS Vorsäule kann bis zu 500µl biologische Probe aufgetragen werden. Mehr als 100 Injektionen können ohne Druckerhöhung appliziert werden.

Switching-Technik mit Vorsäulen: über ein 6-Wege-Ventil kann eine 10 x 1 mm oder 10 x 2 mm DIBS-Vorsäule mit der Trennsäule gekoppelt werden. Zum Trapping der Probe wird ein schwaches Eluent mit geringem organischen Anteil benützt, das die Adsorption der kleinen Molekülen an der unpolaren Porenoberfläche ermöglicht. Mit einem starken Eluenten, welches höheren organischen Anteil hat, können die Analyten auf eine Trennsäule eluiert und dort separiert werden. Die zwei verschiedenen Eluenten benötigen 2 Pumpen.

Puffer-Beispiele: Schwache Eluenten zur Probenaufgabe: 95-100% 0-500 mM Puffer pH 3-8 und 0-5% organischer Anteil. Starke Eluenten für Probetransfer und Analyse: bis ca. 40% organischer Anteil (Acetonitril/ Methanol/ Isopropanol) in 0-500 mM Puffer pH 3-8. Die DIBS-Vorsäulen werden mit Acetonitril/Wasser geliefert, die optimale Lagerung ist bei 0-6°C.

Trenntechnik ohne Switching: ReproSil DIBS C4 kann auch in analytischer Standard-Säule ohne Vorsäule für Proteinentfernung und Probetrennung benützt werden. In diesem Fall erfolgt die Trapping am Anfang der analytischen Säule mit gleichen wässrigen Eluenten, die bei der Probenaufgabe auf die Vorsäule in Switching-Technik benützt werden. Nach der vollständigen Entfernung der Proteinen aus der ganzen Säule kann die aufgetragene Probe mit Erhöhung der organischen Anteil bis ca. 40% des Eluenten getrennt werden.. 2 2 2 2 2 /

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